心臟組織單細胞解離酶MJ001專為人、小鼠、大鼠等動物心臟組織單細胞懸液制備設(shè)計,通過多元復(fù)合酶的溫和酶解作用將心臟組織高效解離成為單個細胞懸液,在高得率的同時能夠獲得高活性的單細胞,后續(xù)適用于單細胞測序、流式細胞分析、流式細胞分選、原代細胞培養(yǎng)、類qi官3D培養(yǎng)等實驗。優(yōu)勢特點:1、一步即用型本產(chǎn)品只需把配套的酶干粉溶解在溶解液里,一步操作即可進行后續(xù)實驗。無需像進口競品一樣,把三四種酶分別溶解在不同溶液里,再分別進行體積計算,后量取不同體積的酶混合在一起并混勻才能使用,本產(chǎn)品無需任何稱量、計算,避免多步驟操作和復(fù)雜的計算,減少出錯概率。2、多元復(fù)合酶本產(chǎn)品是自主研發(fā)生產(chǎn)的多元復(fù)合酶,根據(jù)不同組織的細胞間質(zhì)種類配備8種以上的復(fù)合酶,可以更好的消化解離細胞間的各種組織基質(zhì),比單純使用進口膠原酶IV、DNA酶或進口競品的三四種混合酶的解離效率更高,解離時間短、細胞得率高、細胞活性強、抗原表位完整,自研自產(chǎn)成本更低,更有競爭力。3、解離時間短由于本產(chǎn)品使用的是8種以上自研自產(chǎn)的特異性組織解離酶,大多數(shù)qi官組織在10-15分鐘即可解離完全,解離時間超短,而單純使用進口膠原酶IV、DNA酶或進口競品的三四種混合酶需要1小時左右,甚至需要2-3小時才能解離完全。4、細胞得率高建立在多元復(fù)合酶的基礎(chǔ)上,該產(chǎn)品可以更好的消化細胞間的各種組織基質(zhì),組織消化更徹底,組織單細胞完全釋放出來,組織團塊殘留少,因此細胞得率更高。5、細胞活性強針對不同的組織該產(chǎn)品配套了不同的特異性解離復(fù)合酶,該復(fù)合酶是溫和的解離方式,不像胰酶一樣對細胞有較大損傷,并且該復(fù)合酶酶解消化時間更短,大幅減少了細胞的離體時間,防止了解離酶的過度消化,因此能得到更高活率的單細胞??乖砦桓暾募毎?、抗原表位完整由于該產(chǎn)品酶解效率更高,酶解時間和細胞離體時間更短,組織細胞損傷更低,細胞結(jié)構(gòu)完整性更好,細胞活性更強,因此抗原表位更完整,更有利于抗體結(jié)合染色,解離的單細胞更適合進行流式分析分選實驗。使用方法1、溶解酶干粉首次啟用試劑盒時執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底;然后用移液槍取B瓶中的溶解液反復(fù)吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中,必要時可將槍頭口用剪刀剪大,確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中;隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完全溶解,必要時可放置搖床上搖晃至完全溶解,完全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。2、過濾分裝解離酶在A瓶中酶干粉完全溶解在B瓶溶解液后,根據(jù)后續(xù)實驗如需要無菌解離組織,則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除菌后分裝。建議每5mL分裝一瓶,分裝至A瓶中,分裝后應(yīng)立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中,可保存6個月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用,但反復(fù)凍融不要超過三次,每凍融一次酶活會降低一部分,酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。3、酶解實驗操作(1)實驗準備:預(yù)制碎冰,冰上解凍單細胞解離酶和酶解終止液,單細胞解離儀器開機預(yù)熱,PBS預(yù)冷,眼科剪、鑷子等無菌手術(shù)器械,40μm無菌細胞篩,離心管、離心機等預(yù)冷。(2)組織收集:無菌條件下收集組織,立即置于冷的PBS中,盡可能4h內(nèi)處理,如需放置更長時間,請使用高活性組織保存液(貨號MJ104)。(3)清洗組織:將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì),稱重記錄。(4)剪碎組織:將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中,用鋒利眼科剪碎成1-2mm3小塊,剪至泥糊狀,剪得越碎酶解就越充分,單細胞酶解時間就會越短;如有配備組織單細胞解離儀,覺得剪碎較麻煩也可不用嚴格剪碎,同樣能獲得較好的解離效果。(5)酶解組織:組織剪碎后,取適量單細胞解離酶加入解離管中,上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。(6)單細胞過濾:待組織完全解離后,立即瞬離解離管3s,并將解離管插在冰上,用移液槍吸取上清通過40μm的濾網(wǎng)進行過濾,過濾全程在冰上操作。(7)終止酶解:取等量的酶解終止液(貨號MJ102)或完全培養(yǎng)基進行終止酶解。(8)收集細胞:4℃、400g離心5分鐘后棄上清,用預(yù)冷的PBS清洗后再離心棄上清。(9)紅細胞裂解:取適量紅細胞裂解液(貨號MJ103)重懸細胞沉淀,冰上孵育10分鐘,間歇吹打輕搖,4℃、300g離心5分鐘后棄上清。(10)清洗:取預(yù)冷的PBS重懸,4℃、300g離心5分鐘后棄上清,重復(fù)清洗2次(11)去除碎片:如碎片較多,可用高效碎片去除劑(貨號MJ101)去除碎片。(12)細胞活性檢測:臺盼藍或AOPI染色,活細胞率應(yīng)>85%。實驗注意事項:本產(chǎn)品單供科研使用;如下游實驗需無菌培養(yǎng),全程需在超凈臺內(nèi)進行無菌操作,避免污染;酶解需在37℃,其他操作均在冰上操作,嚴格控制溫度;根據(jù)組織酶解量調(diào)整酶解時間,勤觀察及時確認裂解階段,在保證裂解效果情況下盡可能減少酶解時間,以免時間過長造成對細胞的損傷;若用于單細胞測序等要求較高的單細胞制備,全程需加快速度,單細胞解離后需立即進入下游建庫步驟;該酶溶解后-20℃或-80℃保存,可保存6個月,單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用,但反復(fù)凍融不要超過三次,每凍融一次酶活會降低一部分,酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。